ピーター・パーカー（スパイダーマン）: 主人公で、放射能を浴びたクモに噛まれたことで超人的な能力を得た高校生。彼の物語は、責任とヒーローとしての成長を中心に展開される。 メリー・ジェーン・ワトソン: ピーターの恋人であり、彼の人生において重要な存在。彼女はしばしばピーターのサポート役として描かれる。 グリーン・ゴブリン（ノーマン・オズボーン）: スパイダーマンの宿敵で、ピーターの親友の父親。彼の変身は、スパイダーマンとの対立を生む。 ドクター・オクトパス（オットー・オクタビウス）: 天才科学者で、機械的な触手を持つ悪役。彼はスパイダーマンにとっての強力な敵。 ヴェノム（エディ・ブロック）: スパイダーマンの宿敵で、彼のスーツと共鳴するエイリアンシンビオートを宿したキャラクター。彼はスパイダーマンに対して強い恨みを持つ。 ハリー・オズボーン: ノーマン・オズボーンの息子で、ピーターの親友。彼の物語は友情と裏切りをテーマにしている。 キャプテン・アメリカ、アイアンマン、ブラックウィドウ: マーベルユニバースの他のヒーローたちも登場し、スパイダーマンとのクロスオーバーが展開されることがある。 これらのキャラクターは、マーベルズスパイダーマンのストーリーにおいて重要な役割を果たし、物語の深みを増している。